細(xì)胞凋亡檢測是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。形態(tài)學(xué)檢測是研究細(xì)胞凋亡的基本方法。細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化是多階段的，起初，細(xì)胞間連接和微絨毛消失，細(xì)胞體積縮小，胞漿凝縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)變疏松并與胞膜融合，形成一個(gè)個(gè)空泡，核糖體與線粒體等細(xì)胞器聚集，結(jié)構(gòu)尚無明顯改變，細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細(xì)胞核固縮呈均一的致密物，進(jìn)而斷裂成碎塊，此時(shí)細(xì)胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個(gè)細(xì)胞變成數(shù)個(gè)大小不等的有膜包裹的凋亡小體：最后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細(xì)胞吞噬、消化。上述這些形態(tài)學(xué)的變化，可以通過本試劑盒中的染色及光學(xué)顯微鏡觀察。
 

　　選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸。磷脂酰絲氨酸主要分布在細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)，即與細(xì)胞漿相鄰的一側(cè)。在細(xì)胞發(fā)生凋亡的早期，不同類型的細(xì)胞都會把磷脂酰絲氨酸外翻到細(xì)胞表面，即細(xì)胞膜外側(cè)。磷脂酰絲氨酸暴露到細(xì)胞表面后會促進(jìn)凝血和炎癥反應(yīng)。而AnnexinV和外翻到細(xì)胞表面的磷脂酰絲氨酸結(jié)合后可以阻斷磷脂酰絲氨酸的促凝血和促炎癥反應(yīng)活性。
 

　　細(xì)胞凋亡檢測用帶有綠色熒光的熒光探針FITC標(biāo)記的AnnexinV，即AnnexinV-FITC，就可以用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡非常簡單而直接地檢測到磷脂酰絲氨酸的外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。本試劑盒還提供了碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)染色液，碘化丙啶可以染色壞死細(xì)胞或凋亡晚期喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，呈現(xiàn)紅色熒光。對于壞死細(xì)胞，由于細(xì)胞膜的完整性已經(jīng)喪失，AnnexinV-FITC可以進(jìn)入到細(xì)胞漿內(nèi)，與位于細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)的磷脂酰絲氨酸結(jié)合，從而也使壞死細(xì)胞呈現(xiàn)綠色熒光。
 

　　細(xì)胞凋亡檢測的檢測優(yōu)勢
 

　　1.靈敏度高，背景干擾小；
 

　　2.可在組織及單細(xì)胞中檢測低水平凋亡；
 

　　3.后續(xù)進(jìn)行流式、熒光顯微鏡檢測，對細(xì)胞凋亡進(jìn)行定量；如聯(lián)合使用耦合顯色酶的抗熒光素抗體，能將熒光信號轉(zhuǎn)化為比色信號，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行檢測。