免疫熒光通過特異性熒光抗體結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的生物靶標(biāo)抗原，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶標(biāo)分子在細(xì)胞內(nèi)的分布及定位分析。該方法可以對(duì)組織塊兒、培養(yǎng)細(xì)胞或單個(gè)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記，用于分析蛋白、糖原、及生物/非生物小分子，與此同時(shí)，免疫熒光也可以DAPI、Hochest33342等其他非抗體熒光標(biāo)記染料聯(lián)合使用。
免疫熒光是標(biāo)記免疫技術(shù)發(fā)展zui早的一種，它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)技術(shù)，通過將抗體與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行組織或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。步驟包括，細(xì)胞固定和通透，封閉，孵育一抗，二抗等。除了這些基本步驟，以下建議可以幫助您獲得更好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
用熒光抗體示蹤或檢查相應(yīng)抗原的方法稱熒光抗體法。用已知的熒光抗原標(biāo)記物示蹤或檢查相應(yīng)抗體的方法稱熒光抗原法。免疫熒光組織化學(xué)分直接法、間接法和補(bǔ)體法。
某些抗原可以用熒光素標(biāo)記，制成熒光抗原，標(biāo)記熒光素的方法與制備熒光抗體方法相同。用熒光抗原可以直接檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗體，特異性較好，敏感性較差。染色方法同熒光抗體染色的直接法。由于多數(shù)抗原難以提純或量少不昂貴，一般很少采用此法。
熒光顯微鏡是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。它是由光源、濾板系統(tǒng)和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過物鏡和目鏡系統(tǒng)放大以觀察標(biāo)本的熒光圖像。其被廣泛的運(yùn)用在生物學(xué)、醫(yī)藥研究領(lǐng)域。
